1、1. 切片常規脫蠟至水。

2、如需抗原修復，可在此步后進行2.緩沖液洗 3min/2 次。

3、3. 為了降低內源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色，將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。

【資料圖】

4、4. 緩沖液洗 5min/2 次。

5、5. 滴加 Ultra V Block ， 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。

6、(注:孵育不要超過 10 分鐘，否則會導致特異性染色降低。

7、如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清，這一步可以省略。

8、)6. 緩沖液洗 5min/2 次。

9、7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育1 - 2 小時。

10、(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)8. 緩沖液洗 5min/2 次。

11、9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增強子)，在室溫下孵育 20 分鐘。

12、10 .緩沖液洗 5min/2 次。

13、11 .滴加 HRP Polymer(酶標二抗) ，在室溫下孵育 30 分鐘。

14、(注:HRP Polymer 對光敏感，應避免不必要的光暴露并儲存在不透明的小瓶中。

15、)12 .緩沖液洗 5min/2 次。

16、13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen)，混勻后滴加到切片上，孵育 3 - 15 分鐘。

17、(具體時間由染色深淺決定。

18、)14 .自來水充分沖洗，復染，脫水，透明，封片。

19、簡介：免疫組化，是應用免疫學基本原理--抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及相對定量的研究，稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry)。

20、基本原理：抗體和抗原之間的結合具有高度的特異性，免疫組織化學正是利用了這一原理。

21、先將組織或細胞中的某種化學物質提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動物后獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質。

22、由于抗原與抗體的復合物是無色的，因此還必須借助于組織化學的方法將抗原抗體結合的部位顯示出來，以其達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性，定位或定量的研究。

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